一直努力下去--研究生生活点滴

免疫荧光细胞化学
,为虾米,今天和莉莉我们两人都没染出来
总结了一下
1,可能先前的PBS的PH值不是7.4了,下次用的时候要调个PH值
2,可能一抗木有洗干净
呜呜,掌握的东西,也还是要细心才好[s:3]

需要两种抗体参与，即一抗和二抗(荧光素标记)。一抗对标本中的抗原来说起抗体的作用，但对荧光标记的二抗来说又起着抗原作用。
–    可用来检测标本中未知抗原，也可检测血清中未知抗体。
k间接免疫荧光法操作步骤
¨         标本的处理及非特异染色的封闭同直接法；
¨         一抗染色：
–         加未标记的特异性抗体(通常1:100稀释，用0.01MpH7.4的PBS稀释)，37℃作用30min或4℃过夜。
¨         0.01M PBST漂洗5min×3次(震荡漂洗)；
k间接免疫荧光法操作步骤(续)
¨   加荧光标记的二抗抗体，37℃湿盒避光作用30min。
¨  0.01M PBST避光漂洗5min×3次(例如包上锡纸，在摇床上漂洗)；
¨  甘油缓冲液封片
¨  镜检

¨  优点：敏感性较高，比直接法高10倍左右；制备一种荧光标记抗体，可应用于多种一抗；
¨  缺点：是参加反应的因子较多，产生非特异性染色的机会增多。
m间接免疫荧光法的注意事项
¨  荧光染色后一般在1h内完成观察，或于4℃保存4h，时间过长 ，会使荧光减弱。
¨  每次试验时 ，需设置以下三种对照：
–   阳性对照：阳性血清+荧光标记物
–   阴性对照：阴性血清+荧光标记物
–   荧光标记物对照：PBS+荧光标记物
m间接免疫荧光法的注意事项(续)
¨  标本片需在操作的各个步骤中，始终保持湿润，避免干燥。
¨  一抗和二抗应始终保持在标本片上，避免因放置不平使液体流失，从而造成非特异性荧光染色

[ 本帖最后由 85505542 于 2007-4-22 06:47 PM 编辑 ]

吼吼,我们所阴盛阳衰,女人当家,也是女生占绝大多数
女生多了,这自然就热闹了
哪里的衣服打折,今天的发型好看吗,谁谁变胖了变瘦了
话题多了去了
当然,试验中仪器,试剂也难免有冲突
还好还好,我们这台戏也算丰富多彩.

嘻嘻,发两张照片,一张是前年的,一张是前天的
感叹,时光如梭

[ 本帖最后由 85505542 于 2007-4-22 08:19 PM 编辑 ]

小8姐姐，偶也来了~~

看起来好开心的生活啊，怪不得小8姐姐越来越漂亮了~~[s:4]

原帖由 飘零的花瓣 于 2007-4-22 08:22 PM 发表
小8姐姐，偶也来了~~

看起来好开心的生活啊，怪不得小8姐姐越来越漂亮了~~[s:4]

谢谢飘飘
从扎两个辫子到扎一个辫子,吼吼,现在是再也没有勇气扎两个辫子了

原帖由 601kele 于 2007-4-22 09:11 PM 发表
这位学姐我想考重大英语文学专业，不知您是不是这个方向的，我想请教一下有经验的前辈考察重点，您能回答吗？如果能那就太好了。

你好,我是学医的,帮不上你的忙了

[s:9] 有8姐的pp[s:4]
好漂亮哦，某人好有福气

我也来看看 热闹。。。。
学习太郁闷了。来上网 呵呵

8姐靓得没得说哦～～

原帖由 flygoing 于 2007-4-22 11:17 PM 发表
[s:9] 有8姐的pp[s:4]
好漂亮哦，某人好有福气

谢谢fly

原帖由 ylzhhwzhxhb 于 2007-4-23 03:06 PM 发表
我也来看看 热闹。。。。
学习太郁闷了。来上网 呵呵

嘻嘻,欢迎你来到我们freekaoyan哦
嘻嘻,还可以去心灵客栈喝喝茶,可以去匿名心情发泄发泄哦